Cultivo de Larvas
Los huevos de distintas especies de estrongilidos que parasitan rumiantes, equinos y porcinos son similares en cuanto a su tamaño y morfología, lo cual complica su identificación. El conocimiento de la composición específica de los huevos que integran la carga parasitaria es importante ya que en infecciones mixtas, la fecundidad y el poder patógeno son diferentes.
Esta técnica complementa los ensayos coproparasitarios de Teuscher y McMaster ya que genera las condiciones óptimas de temperatura, humedad y oxigenación de la materia fecal, facilitando la maduración y eclosión de los huevos y finalmente, la evolución de las larvas hasta el tercer estadio (L3 infectante), las cuales presentan características y rasgos morfológicos individuales que permiten su clasificación en género y en algunos casos también de especie.
Materiales
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2 vasos descartables de 200 ml
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Gasa común
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Telgopor granulado
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Recipiente decantador cónico
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Agua a 30⁰C libre de cloro.
Procedimiento
Si se procesaron varias muestras para el recuento de H.p.g., es conveniente conformar muestras compuestas tomando 2-3 gr de cada una de las muestras que resultaron con conteos. Colocar la muestra compuesta de materia fecal en un recipiente y agregar telgopor granulado mezclando hasta lograr una consistencia poco pastosa (desmenuzada).
Paso 1: Recortar toda la circunferencia de la boca del vaso (A) a un cm del borde y conservar ambos fragmentos.
Paso 3: Tapar con una gasa la boca del vaso con la muestra y sujetarla colocando el recorte (mitad superior del vaso B) en forma invertida tratando de que quede firme y contenga el material a cultivar.
Paso 2: Realizar la mezcla de materia fecal-telgopor en un recipiente y colocar en la mitad inferior del vaso recortado (A).
Paso 4: Colocar agua en el vaso (C) hasta completar 1/3 de su altura.
Paso 5: Colocar el vaso (A+B) dentro del vaso (C) Asegurar que la gasa no tome contacto con el agua del vaso (C). Perforar el fondo del vaso (A) con un ansa caliente o tijeras para permitir la oxigenación del cultivo.
Paso 6: Identificar el cultivo con el nombre de la muestra, la fecha de inicio del cultivo y la fecha de finalización. Incubar en estufa a 22-25 ⁰C por 15 días.
Paso 8: Transferir una pequeña alícuota a un portaobjetos y agregar 1-2 gotas de solución yodurada. Llevar al microscopio para su lectura.
Paso 7: Finalizada la incubación, retirar el vaso (C), transferir el cultivo (A+B) a un vaso cónico y sumergirlo en agua tibia libre de cloro. Dejar decantar a temperatura ambiente 12-24 h. Para recuperar las larvas infectantes, concentradas en el fondo del vaso cónico, tomar con una pipeta 3-4 mL y conservarlos, sin agregados químicos, en un tubo de centrifuga hasta su lectura.
Paso 9: Se deben identificar 100 L3 por cultivo y aplicar los porcentajes obtenidos a los conteos de huevos por gramo (H.p.g.) de materia fecal.
Videos demostrativos